细胞培养——收到细胞的处理方式

                                                                   细胞培养——收到细胞的处理方式

                                                                        圣宾仪器科技上海有限公司

       细胞活化︰  
 1. 收到细胞株包裹时， 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞  株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存(置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。   
2.冷冻细胞解冻程序:  
2.1. 依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比  例， 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之  血清种类， 若因实验需要， 必须有所不同时， 务必以缓慢比例渐次改变培养  基组成， 确定细胞适应后， 方进行所需之实验。 
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse  serum, 马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞株资料单指定之血清种  类培养之。 
2.3. 将培养基置于37 °C 水槽中回温， 回温后喷以70 % 酒精并擦拭之， 移入无  菌操作台内。取出冷冻管， 立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 水面高度不可  接近或高过冷冻管之盖沿， 否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全  部融化后， 以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部， 移入无菌操作台内。 
2.4. 依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask  中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基， 混  合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。
2.5. 对绝大多数细胞而言，1 % 以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活  化有不佳影响，不需立刻由解冻细胞中去除， 待di二天确定细胞生长或贴附良  好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需  立即去除DMSO 者， 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中，  离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，  将细胞均匀混合后， 转移至培养瓶中， 再放入37 °C， 5 % CO2 培养箱培养。 
收到T25 flask 细胞时， 处理方式为︰  
1. 于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask 均加满培养基。请检查  flask 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题， 不  要打开盖子，请立即通知细胞实验室。 
2. 将原封之T25 flask 静置于37 °C， 5 % CO2 培养箱中，使细胞回温至37 °C， 并  让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后，于无菌操作箱内取出flask  内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，仅留约5-10ml 培养基于flask 内，依  一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘， 则将细胞做传代培养。

                                                                                                                                                                   本篇转载至实验之家