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Thermo 反相色谱柱使用和维护说明

1 、  适用键合相
反相色谱柱键合相包括:C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP、aQ、Cyano 1 等。
2 2 、  柱体积
色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算:
V 为色谱柱柱体积(mL),r 为色谱柱内径(cm),L 为色谱柱长度(cm)。
3 3 、  色谱柱柱效测试与保存
反相色谱柱出厂时都经过柱效测试,所用化合物为茶碱、邻-硝基苯胺、苯甲酸甲酯、
苯乙醚和二甲苯,如有不同,以柱效报告为准。
在条件允许情况下,请对新色谱柱进行柱效测试。
反相色谱柱出厂时均保存在乙腈-水溶液中。
4 4 、  温度
所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于 60℃。
5 5 、  样品
蕞 好将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解
在初始流动相或极性相近的溶剂中。
样品溶液不应含有任何颗粒物,蕞 好使用 0.5μm 或更小粒径的滤膜过滤。同时建议在
色谱系统中使用在线过滤器。
样品溶液如果使用强溶剂(例如,流动相为水,样品溶剂为甲醇),为达到较好峰形,
需要降低进样量(以 250x4.6mm 规格为例,小于 10μL)。
6 6 、  流动相
所有流动相,特别是含有缓冲盐的流动相,蕞 好当日实验当日配制;如果使用了前日配
制的流动相,请确保流动相 pH 值没有变化,并确保流动相没有长菌。
流动相的 pH 值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱上都仅使
用 pH 范围为 2~8 的流动相( Hypercarb 可以使用 pH 为 1~14 的流动相);如果需要使用
pH 更高(2~10)的流动相,请选用 Hypersil GOLD、Syncronis C18、Betasil C18 等色谱柱,
并请尽量避免使用无机缓冲盐。
请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水(>95%)作为流动相,此类流动相仅适
用于中等疏水的键合相,例如 Hypersil GOLD aQ、Aquasil C18、Syncronis aQ 等色谱柱。
所有流动相都需使用 2μm 滤膜过滤。
7 7 、  色谱柱安装
请小心操作色谱柱。
不要摔、碰色谱柱,这样会损坏色谱柱床,使色谱柱性能下降。
使用合适的连接管路和接头,确保色谱柱连接处死体积降到蕞 低(使用不锈钢接头时需
要尤其注意)。我们建议使用 SLIPFREE  接头,此接头与 Thermo 色谱柱以及其他品牌色谱
柱均完 美匹配。
8 8 、  色谱柱平衡
在进行分析之前,请使用至少 20 倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡。
9 9 、  色谱柱保护
对于“脏”的样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线滤器或保护柱,如果可能,使
用 SPE 小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。
10 、  色谱柱 清洗
常规清洗:
在储存色谱柱之前,请使用至少 20 倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱(去除
缓冲盐),再用更强的溶剂冲洗色谱柱(去除强保留成分,反相色谱通常使用甲醇或乙腈),
然后使用合适的溶剂储存色谱柱。
清洗强保留污染物:
使用如下试剂依次清洗色谱柱
20 倍柱体积不带缓冲盐的流动相;
20 倍柱体积甲醇或乙腈;
20 倍柱体积异丙醇;
20 倍柱体积正己烷或氯仿;
20 倍柱体积异丙醇;
20 倍柱体积甲醇或乙腈。
11 、  色谱柱保存
反相色谱柱,保存溶剂通常是含至少 30% 有机相的水溶液,也可在常规清洗后直接保
存在有机相中。
如果需要长时间储藏,则需要使用较高比例的有机相(有机相比例至少大于 50%,但
不建议使用纯有机相)。
注意:如果违反上述规程,可能使色谱柱失去保修。